Bazı entomopatojenik bakterilerin vejetatif insektisidal protein (vip) gen içeriklerinin ve insektisidal etkilerinin belirlenmesi

Abstract

Bu çalışma ile daha önceki çalışmalarda izole ve karakterize edilmiş lokal Bacillus thuringiensis kurstaki (BnBt, MnD) ve Bacillus thuringiensis tenebrionis (Xd3, Mm2) izolatlarında vip (vip1, vip2 ve vip3) genlerinin PCR ile taranması, izolatlara ait bazı vip genlerinin klonlanması, karakterizasyonu gerçekleştirildi. BnBt ve MnD izolatlarından kısmi olarak saflaştırılan Vip3 proteinlerinin Spodoptera littoralis larvalarına karşı insektisidal aktivitesi belirlendi. Yapılan PCR taraması ve klonlama sonucunda MnD ve BnBt suşlarında vip3 geninin, Xd3 ve Mm2 suşlarında ise vip1 ve vip2 geninin varlığı tespit edildi. BnBt ve MnD izolatlarına ait Vip3 proteinleri, kültür süpernatantlarından iyon değişim kromagrafisiyle elde edilerek SDS-PAGE analizi yapıldı ve proteinlere ait 90 kDa'luk bant belirlendi. Elde edilen proteinler S. littoralis larvalarına karşı kullanıldı ve biyotest sonucunda BnBt'ye ait Vip3 proteininin % 40, MnD'ye ait Vip3 proteininin % 31 oranında öldürücü etkiye sahip olduğu gözlendi. Tezin ikinci kısmında BnBt ve MnD izolatlarına ait tam uzunluktaki vip3A genleri klonlandı ve baz dizilimleri belirlendi. vip3A geninin, 2.370 bp uzunluğunda olup 790 aminoaside sahip olduğu belirlendi. Daha sonra pGEX-2T ekspresyon vektörüne klonlanarak E. coli BL21(DE3)'de ifade edildi ve kısmi olarak saflaştırıldı. SDS-PAGE analizi sonucunda ~90 kDa'luk Vip3A proteinine eklenmiş 26 kDa'luk GST kuyruğu ile ~116 kDa'luk bir bant gözlendi.