Chılo ırıdescent virüs (cıv)'e ait matriks metalloproteinaz genlerinin (136r & 165r) bakülovirüs vektör sisteminde ifadesi ve ürünlerinin aktivite tayini

Abstract

Lepidoptera larvalarının dokularını saran bazal membranlar virüslerin hareketi için fiziksel bir bariyer gibi iş görürler. Bu yüzden tarım zararlısı böceklerin biyolojik kontrolünde potansiyel yaklaşımlardan biri bazal membran proteinlerini parçalayan enzimleri kullanmaktır. Matriks metalloproteinazlar (MMP), ekstraselüler matriksin tüm bileşenlerini parçalayabilecek kapasiteye sahip çinko-bağımlı endopeptidazlardır. Chilo iridescent virüs (CIV) genomu, çinko-bağımlı MMP bölgesine sahip protein kodlayan iki gen (136R ve 165R) bölgesi içerir. Bu genler diğer virüslerdeki muhtemel metallopeptidazlarla %40' tan fazla amino asit dizi benzerliği göstermektedir. Bu çalışmada CIV genomundaki 136R ve 165R açık okuma zincirleri PCR ile çoğaltılarak pFastBacHT transfer vektörlerine klonlandılar. Rekombinant transfer vektörleri kullanılarak bu genleri taşıyan bakmidler oluşturuldu. CIV genlerini taşıyan bakmid DNA'ları rekombinant bakülovirüs üretmek amacıyla Sf9 hücrelerine transfekte edildiler. Oluşan bakülovirüsler kullanılarak yüksek seviyede rekombinant protein ekspresyonu gerçekleştirildi. Üretilen proteinlerin varlığı western blot analizi ile teyit edildi. İfade edilen proteinlerin proteaz genel substratları olan Azocoll ve Azo-caseini parçaladıkları gösterildi. Elde edilen bu sonuçlar, CIV'e ait 136R ve 165R genlerinin kodladığı fonksiyonel metalloproteinazların lepidoptera zararlılarının biyolojik kontrolünde kullanılabilme potansiyeline sahip olduklarını gösterdi.