Amsacta mooreı entomopoksvirüs'e ait AMV197'nin trans-aktivasyonu ve konak seçiciliğindeki rolü

Abstract

Daha önce yapılan çalışmalarda Amsacta moorei entomopoksvirüs'e ait AMV197 kodlu açık okuma zincirinin serin/treonin protein kinaz (pk) kodladığı belirlenmiştir ve virüs genomundaki bu gen yeşil floresan protein (GFP) geni ile yer değiştirilerek rekombinant virüs (Am-pk/gfp) oluşturulmuştu. Bu çalışmalara dayanılarak PK'ın virüsün replikasyonunda ve gen regülasyonunda rol oynadığı düşünülmüştür. Konak hücrenin ve virüs proteinlerinin virüs replikasyonundaki rolünü anlayabilmek için bu yüksek lisans tezinde protein kinaz (pk) geninin trans-aktivasyonunda rol alan proteinlerin belirlenmesi ve rekombinant virüs ve yaban tip virüsün enfeksiyonlarının farklı konaklarda karşılaştırılması hedeflenmiştir. pk geninin trans-aktivasyonunda rol oynayan proteinlerin belirlenmesi için South-Western Hibridizasyon deneyi gerçekleştirildi. Çalışma sonucunda işaretli proba bağlanabilen beş farklı protein bandı (50, 38, 35, 27 ve 16 kDa) belirlendi. Sonuçlar, pk'nın transa-ktivasyonunda rol oynayan proteinlerin virüs kökenli değil hücre kökenli olduğunu gösterdi. pk geninin virüs genomundan silinmesinin farklı konaklarda replikasyonu nasıl etkilediğini belirlemek için rekombinant virüs ve yaban tip virüsün farklı böcek hücrelerindeki (Lymantria dispar, Ld652 (kontrol); Bombyx mori, Bm; Spodoptera frugiperda, Sf9) DNA replikasyonları Slot-Blot Hibridizasyon yöntemiyle ve enfektivitesi End Point Dilution Assay (EPDA) ile karşılaştırıldı. Yapılan çalışmalar sonucunda, konak faktörlerinin pk genini kontrol ederek virüs replikasyonun da etkili olduğu sonucuna varıldı.