Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu

Abstract

Ribulokinazlar (transferazlar, EC 2.7.1.16) L-ribulozu, L-ribuloz 5 fosfata; D-ribulozu, D-ribuloz 5 fosfata dönüşümünü sağlayan enzimlerdir. Bu enzimin katalizlediği reaksiyonlar sonucunda oluşan ürünler, pentoz fosfat yolunda kullanılır.Bu çalışma Anoxybacillus kestanbolensis AC26 sarı ribulokinaz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. Yapılan bu çalışmada Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinazını kodlayan 1695 nt'lik genin baz dizilimi belirlenerek pET-28a(+) vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21 (DE3) pLysS hücresine aktarılarak ribulokinaz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saf ribulokinaz, 60°C ve pH 9'da optimum aktivite gösterdi. Enzimin, D-ribuloz için Km değeri 0,94 mM olarak belirlendi. Enzimin aktivitesi üzerine Mg+2, Ca+2, Li, K, Zn+2 metal iyonlarının, ß-merkaptoetanol ve EDTA'nın etkileri araştırıldı. Mg+2 ve ß-merkaptoetanol'ün aktiviteyi arttırdığı, Zn+2'in aktiviteyi inhibe ettiği, Ca+2, Li, K, EDTA'nın ise aktiviteyi etkilemediği görüldü. A. kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinazının moleküler ağırlığı 61,96 kDa olarak tespit edildi.