Anoxybacillus gonensis g2 çift mutant w137f/v184s ve w137f/v184t ksiloz izomerazlarının saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışma, Gönen Kaplıcası'ndan izole edilmiş olan termofilik A. gonensis G2 suşuna ait Ksiloz İzomeraz (KI) W137F/V184S ve KI W137F/V184T çift mutasyonlu enzimlerin saflaştırılmasını ve karakterizasyonunu kapsamaktadır. KI W137F/V184S için; Km= 91,13 ± 10,54 mM; Vmax= 31,71 ± 1,1 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 1,161 olarak bulundu. KI W137F/V184T için ise; Km= 25,94 ± 3,73 mM; Vmax=7,66 ± 0,37 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 0,985 olarak hesaplandı. KI W137F/V184S ve KI W137F/V184T için optimum sıcaklık 85°C, optimum pH 7,5 olarak belirlendi. KI W137F/V184S 70°C'de yarım saatten sonra aktivitesini hızlı bir şekilde kaybetmiştir. KI W137F/V184T ise aktivitesinin yarısını 80°C'de yarım saatte kaybetmiştir. KI W137F/V184S'nin en iyi pH 8'de kararlı kaldığı, KI W137F/V184T'nin ise, yüksek pH değerlerinde (pH 8 - 9,5) kararlı kaldığı görüldü. KI W137F/V184S'nin en yüksek aktivitesi 10 mM Mg+2 varlığında gözlendi. KI W137F/V184T'nin ise, en yüksek aktivitesi 10 mM Mn+2 varlığında gözlendi. Ca+2, Hg+2, Ni+2, Zn+2, Fe+2 ve Cu+2 bivalent metal iyonlarının her iki mutant KI üzerinde inhibitör etki gösterdiği belirlendi.