Bacillus thuringiensis cry ıva ve cry ıvd genlerine ait proteinlerin bacılovirüs ekspresyon vektor sisteminde üretilmeleri

Abstract

Bu çalışmada, Bacillus thuringiensis subsp. israelensis's ait insektisidal kristal proteinlerini kodlayan crylVA ve crylVD genlerinin baculovirüs ekspresyon vektör sisteminde ekspresyonları gerçekleştirilmiştir. B. thrungiens'in çoğu suşları spor oluşumu esnasında yüksek oranda insektisidal inklüzyonlar üretirler. Bu inklüzyonlar Diptera, Lepidoptera ve Coleoptera gruplarına ait larvalara karşı toksik özelliğe sahiptirler. Bu nedenle, B. thuringiensis çeşitli tarım bitkilerini zararlılardan korumak amacıyla önemli ölçüde kullanılmaktadır. Ancak, bu insektisidal inklüzyonların saf bir şekilde üretilmeleri ve bunların entegre zararlı yöntemlerinde kullanılmaları sadece zararlı olan böceklerin öldürülmeleri bakımından büyük önem taşımaktadır. B. thuringiensis subsp. israelensis'e ait insektisidal kristal proteinlerini kodlayan crylVA ve crylVD genlerinin kodlayan DNA bölgeleri elde edilerek çoğaltıldı. Bu genleri taşıyan DNA fragmanları birlikte Autographa californica nüklear polihedrozis virüsü (AcNPV, Baculovirüs) transfer plazmidindeki polihedrin (polh) promotorunun önüne klonlandı. Transfer plazmidi yabani tip AcNPV DNA'sı ile birlikte Spodoptera frugiperda böcek hücre kültürüne transfekte edildi. Hücre içerisinde oluşan cryTVA ve crylVD genlerine sahip rekombinant AcNPV "plak" yöntemiyle seçilerek saflaştırıldı. Bu genlerin kodladığı proteinlerin sentezleri poliakrilamid jel elektroforez yöntemiyle tespit edildi.