Lactococcus garvieae'nın antijenik proteinlerinin western blot yöntemiyle belirlenmesi

Abstract

Kültür balıkçılığın gelişmesine paralel olarak işletmelerde görülen L. garvieae'nin neden olduğu salgınlar, yetiştiriciliği yapılan türler arasında tehdit oluşturmaktadır. Hastalık, ilk kez Ege Bölgesi ve civarındaki işletmelerde görülmesine rağmen kısa sürede her bölgeye yayılmış ve % 50'nin üzerinde mortaliteye sebep olmuştur. Bu araştırmada Türkiye, İspanya, İtalya ve Fransa'dan izole edilen L. garvieae'nın 43 suşunun, Western Blot tekniğini kullanılarak antijenik protein profillerinin karşılaştırmalı analizlerini yapılmış ve virülans proteinleri belirlenmiştir. Bakterilerin protein profilleri SDS-PAGE ile belirlenmiş, protein izolasyonu yapılmış, protein konsantrasyonu ayarlanmış ve SDS-PAGE elektroforeze yüklenerek yürütülmüştür. Daha sonra protein bantları membrana aktarılmış, blotlama yapılmış ve görüntü alınarak bakterilerin protein profilleri belirlenmiştir. Western Blot yöntemiyle yapılan karşılaştırma sonucunda, 37-50 kDa seviyesi immunodominant bant gözlemlenmiş ve bu bandın virülans proteinleri taşıdığı düşünülmektedir. SDS-PAGE metodunda ise benzerlik oranı düşük bulunan L. garvieae suşları toplam protein analizinde 6 kümede 36 protein tipi oluşturmuştur. Bu da suşlar arasında önemli heterojenitenin olduğunu göstermektedir. İzolatlar arası benzerlik oranlarının düşük olması bu izolatların birbirine uzak alanlardan izole edilmesi ve bakterilerin çevresel ya da kimyasal faktörlerden etkilenerek mutasyon ve benzeri bazı olaylar sonucu genetik yapılarının değişmesinden kaynaklanıyor olabilir.