Armillaria mellea mantarından beta-glukozidaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada, Trabzon'un Hıdırnebi Yaylası'ndan toplanan Armillaria mellea makromantarından, ß-glukozidaz enzimi, iyon değişim kromotografisi ile kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Farklı pH değerlerine sahip tamponlar kullanılarak hazırlanan ham özütlerde ß-glukozidaz aktivitesi araştırıldı ve ekstraksiyon için uygun tampon belirlendi. Hazırlanan ham özütte ve iyon değişim kromotografisi sonrası elde edilen eluatlardan, ß-glukozidaz varlığı, doğal poliakrimalid jel elektroforezi ve substrat boyaması ile ortaya konuldu. Ham özütte üç bandın varlığı gözlenirken, iyon değişim kromotografisi sonrası elde edilen çözeltide iki bandın varlığı gözlendi. Kısmi olarak saflaştırılan enzim biyokimyasal olarak karakterize edildi. Enzimin optimum pH'sı 4,0, optimum sıcaklığı ise 50 °C olarak belirlendi. 4 °C'de 24 saat inkübasyondan sonra A. mellea ß-glukozidazının pH 3,0-6,0 aralığında ve pH 8,0'de oldukça kararlı olduğu gözlendi. Enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, 1 saat inkübasyondan sonra, 20-50 °C aralığında oldukça kararlı olduğu gözlendi. ß-glukozidaz enzimi için Vmaks ve Km değerleri, p-nitrofenil-ß-D-glukopiranozid (pNPG) substratı varlığında sırasıyla 3,646 U/mg ve 0,295 mM olarak bulundu. Ayrıca bazı metal iyonları ve kimyasal maddelerin enzim aktivitesini farklı şekillerde etkilediği tespit edildi. In this study, ß-glucosidase from Armillaria mellea mushroom harvested at Hıdırnebi Plateau in Trabzon were partially purified by using ion-exchange chromatography and characterized. ß-Glucosidase activity was determined in the crude extracts prepared by using buffers having different pH values and the suitable buffer was chosen for the extraction. The presence of ß-glucosidase in the crude enyzme extract and solution obtained after ion-exchange choromatography were put forward by native polyacrylamide gel electrophoresis and substrate staining. While three bands were observed in the crude extract, two bands was observed after ion-exchange choromatography. Partially purified enzyme was biochemically characterized. The optimum pH and optimum temperature of the enzyme were found to be 4.0 and 50 °C, respectively. After 24 h of incubation at 4 °C, the A mellea ß-glucosidase extremely stable in the range of pH 3.0-6.0 and 8.0. When the termal stability profile of the enzyme was analyzed, it was determined that the enzyme was exremely stable in the range of 20-50 °C after 1 h incubation. Vmax and Km values of ß-glucosidase in peresence of pNPG were found to be 3.646 U/mg and 0.295 mM, respectively. It was also determined that some metal ions and chemicals were effected the enzyme activity in different ratio.