Climacocystis borealis'den ß-glukozidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada, Climacocystis borealis mantarından elde edilen ham özütteki ß-glukozidaz enzimi iyon değişim kromotografi yöntemi kullanılarak saflaştırılmış ve ardından saf enzimin biyokimyasal karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Ham özütün 4-metilum-belliferil-ß-D-glukopyranozid (MUG) ile boyanan doğal elektroforezinde iki bant gözlenmiştir. Yapılan iyon değişim kromotografisi sonucu yine aynı yöntemle boyanan doğal elektroforezinde tek bant gözlenmiştir. C. borealis'in ham özütünden kromotografi sonrasında saflaştırılarak elde edilen ß-glukozidaz enzimi için optimum pH 3,0 olarak bulunmuş olup, bu pH'da, 10°C'de ve 24 saat sonunda enzimin aktivitesini %85 oranında koruduğu gözlenmiştir. ß-glukozidaz enzimi için optimum sıcaklığın 60°C olduğu belirlenmiştir. ß-glukozidaz enzimi için PNPG sustratı varlığında Vmaks= 72,46 U/mg ve Km= 8,96 mM olarak bulunmuştur. Bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkisi incelendiğinde, ß-glukozidaz enziminin aktivitesinin Mn2+ iyonu mevcudiyetinde zayıf bir inhibisyona uğradığı, diğer metal iyonları durumunda ise aktivitenin önemli ölçüde değişmediği gözlenmiştir. Bazı kimyasalların enzim aktivitesi üzerine etkisi incelendiğinde, ß-glukozidaz enzim aktivitesinin farklı kimyasallar mevcudiyetinde farklı oranlarda değiştiği gözlemlenmiştir. In this study, ? -glucosidase extracted from a mushroom Climacocystis borealis was purificated by using ion-exchange chromatography and than pure enzyme was characterizated. Native electrophoresis stained by 4-Methylumbelliferyl ? -D-glucopyranoside (MUG) of the crude extract from C. borealis showed two bands. ? -glucosidase from was C. borealis purificated by ion-exchange chromatography and a single band was appeared on the native electrophoresis gel stained by MUG. ? -glucosidase enzyme showed pH optimum value at pH 3,0. It was retained about % 85 of ? -glucosidase activity after incubating at this pH point at 10°C for 24 hours. ? -glucosidase showed temperature optimum at 60°C . In the presence of PNPG, the Vma? and Km values were calculated 72.46 U/mg protein and 8.96 Mm, respectively. When investigated the effect of some metal ions on the enzyme activity, ? -glucosidase activity inhibited in the presence of Mn2+ and wasn?t exchange in the presence of other metal ions. When investigated the effect of some chemicals on the enzyme activity, it was seen that ? -glucosidase activity vary different ratios in the presence of some chemicals.