Erwinia amylovora EAKKB29 izolatının harpin geninin klonlanması ekspresyonu ve altındane ekmeklik buğday (Triticum aestivum L.) fideleri üzerinde etkilerinin araştırılması

Abstract

Harpin doğal olarak meydana gelen bakteriyel içerikli bir proteindir. Bitkinin doğal savunma mekanizmasını harekete geçiren harpin, ilk defa bakteriyel patojen olan Erwinia amylovora'dan izole edilmiştir.Bu çalışmada, Erwinia amylovora EAKKB29 hrpN geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve Triticum aestivum bitkisi üzerine etkilerini konu almaktadır. hrpN geninin 1200 nt' lik baz dizini belirlenerek, pET-28a(+) ve pET-20b(+) vektörlerine klonlandı. Gen, E.coli BL21 hücresinde, ekspres edildi ve saflaştırıldı. Harpin proteininin moleküler ağırlığı 40 kDa olarak tespit edildi. Saflaştırılan HrpN(Ea)E, HrpN(Ea)E-His, HrpN(Ea)I ve HrpN(Ea)I-His proteinlerinin Triticum aestivum bitkisinin yaprak ve kök uzunluğuna, bitkinin kuru ve yaş ağırlığına etkileri araştırıldı. HrpN(Ea)I proteininin Triticum aestivum bitkisinde en iyi etkiyi gösterdiği belirlendi. Triticum aestivum fideleri üzerine en etkili konsantrasyonun 300 μl (4,5 μg) olduğu, 900 μl (13,5 μg)' den sonraki konsantrasyonlarda ise etkinin azaldığı tespit edildi.