Chılo ırıdescent vırus'e ait 337l ve 295l genlerinin ifadesi ve proteinlerinin birbirleriyle etkileşimleri

Abstract

Chilo Iridescent Virüs (CIV) Lepidoptera, Diptera, Coleoptera, Hymenoptera ve Orthoptera ordolarına ait çok sayıda böceği enfekte eden geniş konak spektrumuna sahip bir böcek virüsüdür. CIV virionları endositosis ile konak hücrelerine girer ve viral genom bir sinyal ile nukleusa yönlendirilir. CIV 337L geni açık okuma zinciri (412 amino asit) glikoprotein hormonu beta zincir sinyalini ve 295L geni açık okuma zinciri (1343 amino asit) ise iki yönlü nükleer lokalizasyon sinyalini kodlamaktadır. Askovirüslerde bulunan, 337L proteininin homologları ile yapılan çalışmalar, bu proteinin viral enfeksiyonun başlayabilmesi için konak hücreye tutunmayı sağladığını göstermiştir. 295L proteininin diğer Frog Virüs 3 (FV3)'te bulunan homoloğu ile yapılan çalışmada ise bu proteinin viral genomun nükleusa iletilmesinde rol oynadığı tespit edilmiştir. Bu iki proteinin etkileşimleri viral enfeksiyonun hızlı ve verimli bir şekilde gerçekleşmesi açısından önemlidir. Bu çalışmada, 337L HA-taq ve 295L His-taq içerecek şekilde Bac-to-Bac ekspresyon sisteminde Spodoptera frugiperda (Sf9) hücrelerinde ifade edildi. Yapılan Western Blot analizleriyle 337L'ye ait proteinin yaklaşık 46 kDa ve 295L'ye ait proteinin ise yaklaşık 95 kDa olduğu belirlendi. Pull down analizi ile 337L ve 295L proteinleri arasındaki etkileşim, HA antikorları kullanılarak Western Blot ile analiz edildi ve 46 kDa'luk bant gösterildi. Sonuç olarak, saflaştırılan 295L'ye bağlanarak 337L'nin de saflaştırıldığını ve böylece 337L ve 295L gen ürünleri arasındaki etkileşim kanıtladı.