Amsacta moorei entomopoksvirüse ait AMV133 kodlu açık okuma zincirinin homolog rekombinasyonla silinmesi ve rekombinant virüs oluşturulması

Abstract

Amsacta moorei Entomopoxvirüs (AmEV) Poxviridae familyasına ve Entomopoxviridae subfamilyasına ait bir böcek virüsüdür. AmEV `nin tüm genom analizinin yapıldığı çalışmada AMV133 kodlu açık okuma zincirinin muhtemel bir lipaz kodladığı ileri sürülmüştür. Önemli böcek zararlıları üzerinde yüksek derecede patojenik etki göstermektedir. Bunun yanında, AmEV gen ekspresyon ve gen terapi vektörü olarak kullanılabilmekte ve insan virüslerinin mekanizmalarının anlaşılmasında çalışılabilecek model virüs olması bakımından büyük öneme sahiptir.AMV133 genini silmek için transfer vektör ve geçici ekspresyon vektörün oluşturuldu. Deneyler iki farklı grup halinde yapıldı. Birinci grup, hem transfeksiyon hem de plak deneylerinde sadece transfer vektörün kullanıldığı gruptur. İkinci grup ise, transfer vektörünün yanında geçici ekspresyon vektörünün kullanıldığı gruptur.AMV133 geni homolog rekombinasyon ile AmEV genomundan silindi. Oluşturulan rekombinant virüs Am?Lip/gfp olarak isimlendirildi. Yapılan çalışmalarda, ikinci grup transfeksiyon solüsyonunda daha fazla gfp gözlemlendi, aynı zamanda plak deneylerinde de ikinci grupta daha fazla rekombinant virüs gözlemlendi. Ancak, her iki grupta oluşturulan rekombinant virüsler çoğaltılamadı. Bu da, lipazın AmEV için önemli bir gen olduğunu göstermektedir.