Spodoptera exigua pkg geninin antisense RNA ile susturulmasına yönelik çalışmalar

Abstract

Bakülovirüslerle enfekte olan böceklerde enfeksiyon sonucu bazı davranışsal değişiklikler meydana gelir. Bu davranışsal değişimler böceğin aşırı aktif hareketi ve bulunduğu yerin dikey doğrultusunda (bitkinin) en üst noktaya tırmanması şeklindedir. Virüs enfeksiyonu sonucunda böcekte meydana gelen davranışsal değişikliklere neden olan mekanizmaların çoğu bilinmemektedir. Bu çalışmada virüsün konak canlıda oluşturduğu davranış değişikliğinden sorumlu olduğu düşünülen cGMP protein kinaz (pkg) geninin rolü incelenmiştir. for geninin Drosophila melanogaster ve Apis mellifera gibi bazı farklı böceklerde, yem arama davranışını ve hareket kabiliyetini sağladığı gösterilmiştir.Bu çalışmanın amacı Spodoptera exigua pkg geninin RNA interferans tekniği kullanılarak baskılanması ve pkg geninin konağın davranış değişikliğindeki rolünün aydınlatılmasıdır. Çalışmada öncelikle gfp ve pkg genlerinin, gene özgü dsRNA üreten AcMNPV virüsü ile susturulduğu tespit edildi. Bu amaçla hedef genlere (pkg ve gfp) karşı dsRNA üreten AcMNPV bakmidleri ayrı ayrı gfp ekspresyonu yapan rekombinant AcMNPV ile Sf-9 hücrelerine birlikte enfekte edildiler. Ko enfeksiyon sonucunda 3. ve 4. gün de pkg ve gfp genlerinin susturulduğu belirlenmiştir. Bu deneyi takiben pkg geninin susturulmasında daha farklı sistemlerin test edilmesi amacı ile pkg genine karşı firkete yapısında dsRNA üreten bakmidin inşası için gerekli plazmid vektörler hazırlanmıştır.Bu çalışmada aşırı aktif hareket etme davranışına etkide bulunması muhtemel konak proteinlerin araştırılmasına katkı sağlayacak viral bakmid sisteminin oluşturulmasında kullanılacak teknolojinin tasarımı hedeflenmiştir.