Anoxybacillus sp. Pdf1 lipaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu

Abstract

Lipazlar (triaçilgliserol hidrolazlar; EC.3.1.1.3) lipid-su arayüzeyinde trigliseritlerin hidrolizini katalizleyen enzimlerdir. Mikrobiyal lipazlar, deterjan, transesterifikasyon ve kiral bileşiklerin sentezlenmesi açısından endüstriyel açıdan oldukça ilgi çekmektedirler. Termofilik mikroorganizmaların lipazları sıcaklık ve kimyasal denatürasyona karşı dirençli olduklarından dolayı endüstiyel süreçlerde önemli rolleri vardır.Bu çalışma Anoxybacillus sp. PDF1 lipaz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. PDF1 lipazını kodlayan 740 nt` lik genin baz dizilimi belirlenerek pET28a+ vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21 hücresine aktarılarak lipaz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saflaştırılan lipazın maksimum aktivitesi 60ºC pH 8'de incelendi. p-nitrofenil butirat için olan 0,348 mM Km değeri ile diğer birçok lipaz enzimlerine göre daha düşük bir Km değerine sahip olduğu belirlendi. Mg+2, Li, Ca+2, K, Zn+2, ve Co+2 metal iyonlarının etkisi incelendi. PDF1 lipazının moleküler ağırlığı 28 kDa olarak tespit edildi. Elde edilen veriler ışığında, enzimin biyokimyasal özellikleri, enzimin önemli bir endüstriyel enzim olabileceğini göstermektedir.