Malacosoma neustria nükleopolihedrovirüs (ManeNPV)'ün malacosoma disstria hücre kültüründe in vitro replikasyonu ve konak spektrumunun araştırılması

Abstract

Çalışmada, Malacosoma neustria nükleopolihedrovirüs (ManeNPV)'ün Malacosoma disstria Md203 hücre kültüründeki replikasyonu araştırıldı. Enfeksiyon, sitopatik etkiler, ektrasellüler virüs üretimi ve virüs çoğalma eğrisi, polihedral inklüzyon yapı oluşumu, viral DNA replikasyonu ve viral yapısal proteinlerin sentezi ile belirlendi.ManeNPV ile enfekte Md203 hücrelerinde sitopatik etkilerin (CPE) enfeksiyondan 24 saat sonra meydana geldiği görüldü. İlk polihedral inklüzyon yapı (PIB) oluşumu enfeksiyondan 36 saat sonra gözlendi. Enfeksiyondan 4 gün sonra hücrelerin çoğunun kültür kabının tabanından koptuğu tespit edildi. Hücrelerde, granülleşme, yuvarlaklaşma, parçalanma ve nukleusun kararması gibi tipik NPV sitopatik etkileri görüldü. Ekstrasellüler virüs (BV) üretiminde önemli miktarda artış enfeksiyondan 48 saat sonra gözlendi. Enfeksiyondan 96 saat sonra Md203 hücrelerinde 103 kat ekstrasellüler virüs üretildiği belirlendi. Viral DNA replikasyonunun enfeksiyondan 24 saat sonra başladığı slot blot hibridizasyonuyla belirlendi. Viral proteinlerin sentezi poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile belirlendi ve polihedrin proteini enfeksiyondan 36 saat sonra ortaya çıktığı tespit edildi.ManeNPV'nin konak spektrumunu belirlemek amacıyla Tn5, LdElta, Bm-5, Sf21, Se-1 ve Cf-124T hücreleri ManeNPV ile enfekte edildi. Hücrelerin virüse olan duyarlılıkları; CPE'lerin tespiti, ekstrasellüler virüs üretimi ve DNA replikasyonuyla belirlendi. Tn5 ve LdElta hücrelerinin tipik NPV CPE'lerini gösterdikleri ve ManeNPV için üretken hücre kültürleri oldukları tespit edildi. Her iki hücrede de üretilen BV miktarının enfeksiyondan 120 saat sonra 10 kat arttığı belirlendi. Aynı zamanda viral DNA replikasyonunun Tn5 ve Md203 hücrelerine göre LdElta hücrelerinde daha yüksek seviyede olduğu gözlendi.Tüm sonuçlar ManeNPV'nin Md203 hücre kültüründe verimli olarak üretildiğini gösterdi. Üretkenlik seviyesinin tipik üretken bakülovirüs enfeksiyonuna eşdeğer ve ManeNPV-Md203 sisteminin bilimsel ve ticari olarak kullanılma potansiyeline sahip olduğu tespit edildi.