Russula delica (Russulaceae)'dan polifenol oksidaz enziminin karakterizasyonu

Abstract

?Russula delica (Russulaceae)'dan Polifenol Oksidaz Enziminin Karakterizasyonu? isimli bu çalışmada, yabani ve yenilebilir bir mantar olan Russula delica'dan elde edilen ham özütteki Polifenol Oksidaz (PFO) enzimi spektrofotometrik bir yöntem kullanılarak karakterize edilmiştir. Ham özütün 3,4-dihidroksi fenilalanin (L-DOPA) ile boyanan doğal elektroforezinde Rf değerleri 0,34 (koyu) ve 0,64 (soluk) olan iki bant gözlenmiştir. Ham enzim özütü hem 3-(4-hidroksifenil)-propionikasit (PHPPA) gibi monofenollerin hidroksilasyonunu ve hem de 4-metil katekol (4-MK) gibi difenollerin oksidasyonunu katalizlemiştir. R. delica'dan elde edilen ham özütün hem monofenolaz hem de difenolaz aktivitesi için optimum pH 5,0 olarak bulunmuş ve bu pH'da, 4 ?C'de ve 24 saat sonunda enzimin her iki aktivitesini de % 90 oranında koruduğu gözlenmiştir. Monofenolaz ve difenolaz aktiviteleri için optimum sıcaklığın 30 ?C olduğu ve bu sıcaklıkta 60 dak sonunda enzimin aktivitesini % 90 oranında koruduğu belirlenmiştir. Monofenolaz aktivitesi için PHPPA substratı varlığında Vmaks 769.23 U/mg protein ve Km 0,92mM olarak, difenolaz aktivitesi için ise 4-MK substratı varlığında Vmaks 90 U/mg protein ve Km 0,34 mM olarak belirlenmiştir. Askorbik asit, sodyum metabisülfit, sistein ve benzoik asit kullanılarak yapılan inhibisyon çalışmasında denenen tüm inhibitörlerin R. delica PFO'sunu inhibe ettiği tespit edilmiştir. Bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkisi incelendiğinde, enzimin her iki aktivitesinin de metal iyonlarına karşı oldukça duyarlı olduğu gözlendi. Bu veriler ışığında R. delica'dan hazırlanan ham özütteki PFO enziminin genel PFO inhibitörleri ve bazı metal iyonlarına karşı hassas özellikler sergilediği söylenebilir. In this study, polyphenol oxidase (PPO) extracted from a wild edible mushroom Russula delica was characterized by using a spectrophotometric method. Native electrophoresis stained by L-dihydroxyphenylalanine of the crude extract from R. delica showed two bands having Rf values of 0.34 (major) and 0.64 (minor) respectively. The crude extract was able to catalyze both hydroxylation of some monophenols like 3-(4-hydroxyphenyl)-propionic acid (PHPPA) and oxidation of some o-diphenols like 4-methylcatechol (4-MK). The crude extract showed pH optimum values at pH 5.0 for both monophenolase and diphenolase activities. After incubating at this pH point at 4 ?C for 24 hours it was observed that the crude extract retained about 90% of its original monophenolase and diphenolase activities. The crude extract showed temperature optimum at 30 ?C for both of activities. When incubated at this temperature for 60 min the crude extract retained about 90% of its original monophenolase and diphenolase activities. The Vmax and Km values were calculated 769.23 U/mg protein, 0.92 mM and 90 U/mg protein, 0.34 mM for monophenolase and diphenolase activities respectivly. Ascorbic acid, sodium metabisulphide, cystein and benzoic acid were tested as the inhibitor and they all inhibited both of activities of the crude extract. Both of activities were highly sensitive to metal ions. Through these findings, it can be concluded that the polyphenol oxidase in crude extract from R. delica showed highly sensitive properties against some common PPO inhibitors and metal ions.