Katalaz enzimi aktivitesi üzerine peroksinitrit etkisinin incelenmesi

Abstract

Canlı organizmalarda oksidanlar ile antioksidanlar arasında bir denge mevcuttur. Katalaz enzimi tüm canlı dokularında mevcut bir antioksidan enzim olup turnover sayısı en yüksek enzimdir. Oksijenin eksik indirgenme ürünlerinden olan H2O2'nin dönütürülmesinde görev alan bu enzim özellikle karacier mikrozomlarında yüksek konsantrasyonda bulunmaktadır. Çalımada kullanılan peroksinitrit, asidik çözeltideki hidrojen peroksidin sodyum nitrit ile muamele edilmesiyle oluan kararsız peroksinitröz asidin sodyum hidroksit kullanılarak kararlı peroksinitrit anyonuna dönütürülmesi sonucu elde edildi. Sentezlenen peroksinitritin kararlılıı sıcaklık ve pH'ya balıdır. Anyon bazik ortamda ve -70 0 C'de uzun zaman muhafaza edilebilmektedir. Sentezlenen peroksinitritin konsantrasyonu molar absorptivite katsayısından (e: 1670 M-1.cm-1; 302 nm'de) ölçülebilmekte ve NaOH ile istenen konsantrasyonda çözeltisi elde edilebilmektedir.Palamut karacier dokusundan (40.000 g, 10 dakika) elde edilen mikrozomal katalaz ekstraktının aktivitesi klasik yöntem olan 240 nm'de H2O2'nin absorbansındaki azalmanın ölçülmesi ile yani kinetik yolla tespit edildi. Ortama ilave edilen 5 faklı konsantrasyondaki (10, 20, 40, 50 ve 100 ?M) PN'in çözeltisi ile katalaz aktivitesi tayin edildi. Ayrıca nötral ya da asidik ortamda oluan bozundurulmuş peroksinitrit (BPN) in 5 farklı konsantrasyonu ile de muamele edilen katalaz enziminin aktivitesi ölçüldü. Sonuç olarak PN ve BPN ürünlerinin katalaz enziminin inaktivasyonuna neden olduğu ve bu inaktivasyonun konsantrasyona bağımlı olduğu tespit edildi. In living organisms there is a balance between oxidants and antioxidants. Catalase,an antioxidant enzyme, which occurs in all living tissues, has the highest turnover number. This enzyme especially occurs in large concentrations in liver microsomes and plays a role in the convertion of H2O2, one of the short reduction products of O2. Peroxynitrite used in the study, obtained by convertion of instable peroxynitrose,formed by treating acidic hydrogen peroxide solution with sodium nitrite, using sodium hydroxide to stable peroxynitrite anion. The stability of the synthesized peroxynitrite is depend on temperature and pH. Anion can be keeped in basic media and at -70 0 C for a long time. The concentration of synthesized peroxynitrite can be measured by molar absorbtivity coefficient (e: 1670 M-1.cm-1; at 302 nm) and with NaOH wanted concentrations can be obtained. The activity of microsomal catalase extract obtained from bonito?s liver tissue (40.000 g, 10 minutes), is confirmed with the clasical method, measuring the decrease in the absorbance of H2O2 at 240 nm. Catalase activity is determined by adding 5 different concentrations of peroxynitrite solution (10, 20, 40, 50 and 100 ?M) into the media. Also enzyme activity is measured with 5 different concentrations of vicious peroxynitrite solution formed in neutral or acidic media. In conclusion, it?s confirmed that, the products of PN and BPN caused inactivation of catalase enzyme and this inactivation is due to concentration.